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本试剂盒是专为两步法RT-PCR第一步实验配制的，具有高灵敏度的RT-PCR反应系统，可以从极低量的总RNA或poly（A)+ RNA合成第一链cDNA。该试剂盒中使用的逆转录酶Quant Reverse Transcriptase与通常使用的Moloney鼠白血病病毒来源的MMLV和鸟成髓细胞病毒来源的AMV不同，是一种使用大肠杆菌工程菌进行重组表达的全新高效逆转录酶。该酶能够高效转录多种RNA模板，最大限度将RNA转录成cDNA第一链。

• 反转录效率可达90%。
  
• 37℃一步完成整个实验。
  
• 可通读GC含量高、二级结构复杂RNA模板。
  
• 对后继的PCR或定量PCR实验兼容性好，适合各种PCR耐热聚合酶。

• 适合于反转录模板量为50ng～2μg的总RNA。
  
• 实时荧光定量RT-PCR。
  
• 半定量PCR反应。
  
• 3'-RACE，5'- RACE等。

• 用于cDNA合成反应的溶液试剂尽可能用DEPC进行处理，并在高压灭菌后使用。有些试剂不能高压灭菌时，首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后，再将溶液进行过滤除菌处理。
  
• RNA样品要避免基因组DNA污染。
  
• 避免多次反复冻融RNA。
  
• 试剂盒的各组成成分应在-20℃保存。
  
• cDNA产物应置于-20℃保存。

• 将模板RNA在冰上解冻；引物、10×RT mix（其中包含RNasin和DTT）、Super pure dNTP混合液、RNase-Free ddH2O在室温（15～25℃）解冻，解冻后迅速置于冰上。使用前将每种溶液涡旋振荡混匀，简短离心以收集残留在管壁的液体。
  
• 按照表1的逆转录体系配制混合液，彻底混匀，涡旋振荡时间不超过5min。简短离心，并置于冰上，RNA模板请于第4步加入。
  表1：逆转录反应体系：
  

  加入物	加入量	终浓度
  10×RT Mix	2μL	1×
  Super pure dNTPs（2.5mM each）	2μL	0.25mM each dNTP
  Oligo-（dT)15或Random（10μM)	2μL	1μM
  Quant Reverse Transcriptase	1μL	（20μL反应体系)
  RNase-Free水	X μl
  模板RNA，在第4步加入	X μl
  总体积	20μL

  注：
  • 也可根据实验具体需要，加入基因特异性引物
    
  • 如果下游进行荧光定量PCR实验，建议使用10μL逆转录反应体系，各反应组分相应减半。从而可以与SuperReal PreMix Plus（WH0103、WH0104）以及QuickFire qPCR PreMix（WH0105、WH0106）的反应次数匹配。
  
  
• 如果要做多个逆转录反应，可以将配制好的混合液后分装在单个反应管中，置于冰上。
  
• 将模板RNA（50ng～2μg）加入到混合液中，彻底混匀，涡旋振荡时间不超过5sec，简短离心以收集管壁残留的液体。
  
• 37℃孵育60min。
  
• 将逆转录的产物进行后续PCR反应和荧光定量PCR反应。